大家好，感谢邀请，今天来为大家分享一下琼脂糖凝胶电泳的问题，以及和琼脂糖凝胶电泳原理简述的一些困惑，大家要是还不太明白的话，也没有关系，因为接下来将为大家分享，希望可以帮助到大家，解决大家的问题，下面就开始吧！
本文目录
- 琼脂糖电泳是怎样制胶的
- 琼脂糖凝胶电泳原理***琼脂糖凝胶电泳原理简述
- 琼脂糖凝胶电泳的原理
- 琼脂糖凝胶电泳分离核酸分子的实验步骤大体有哪几步
- 什么是紫色琼脂糖凝胶电泳
- dna的琼脂糖凝胶电泳为什么用0.8%
- 琼脂糖凝胶电泳的原理及影响因素
一、琼脂糖电泳是怎样制胶的
1、制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml):称取0.7 g(0.5 g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小烧杯.微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1.0%琼脂糖凝胶液。
2、胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在固 *** 置放好梳子.将 *** 到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层。
3、室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中。添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止。
商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，phar *** cia），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。
琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。
琼脂糖 Agarose，缩写为AG，是琼脂中不带电荷的中 *** 组成成份，也译为琼胶素或琼胶糖。琼胶糖化学结构由β-D-吡喃半乳糖(1-4)连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基单位构成.
把琼脂糖，即几乎不含 *** 根的主要成分为多糖的琼脂，溶于热水， *** 制成的凝胶。制成的小颗粒用于凝胶过滤。适于用sephadex不能分级分离的大分子的凝胶过滤，若使用5%以下浓度的凝胶，也能够分级分离细胞颗粒、 *** 等。
利用其吸附 *** 小的特点，有时用它代替琼脂、以作为免疫电泳或凝胶内沉降反应的支持物。
二、琼脂糖凝胶电泳原理***琼脂糖凝胶电泳原理简述
1、琼脂糖凝胶电泳原理：琼脂糖凝胶具络，物质分子通过时到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的 *** 质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相比于蛋白质太大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广泛应用于核酸的研究中。琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳 *** 。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。
2、核酸是两 *** 电解质，其等电点为pH2-2.5，在常规的电泳缓冲液中（pH约8.5），核酸分子带负电荷，在电场中向正极移动。核酸分子在琼脂糖凝胶中泳动时，具有电荷效应和分子筛效应，但主要为分子筛效应。线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中移动，因而迁移得越慢。
三、琼脂糖凝胶电泳的原理
琼脂糖凝胶电泳的分析原理：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有 *** 结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的 *** 质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。
琼脂糖凝胶具有 *** 结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的 *** 质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相比于蛋白质太大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广泛应用于核酸的研究中。
蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷，在电场中受力大小不同，因此跑的速度不同，根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的pH在6~9之间，离子强度0.02~0.05为最适。常用1%的琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广。普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达10^7bp的DNA片段。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复 *** 质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速率向正极方向移动。
四、琼脂糖凝胶电泳分离核酸分子的实验步骤大体有哪几步
接着就是制胶了，一般都是制浓度为1%的琼脂糖胶，比如我们做20ml的胶，就是量20ml的TBE和称取0.2g的琼脂糖，微波炉加热煮至透明无亮晶晶的小点（也就是琼脂糖全部融化完，大概煮1min），等温度降到60℃左右（放在你的手上感觉到很烫，但是能忍受10秒钟就行了），加入1微升的核酸染料（我们用的是北京鼎国的GoldViewTM核酸染料，这种核酸染料毒 *** 不大），摇匀之后倒胶，避光 *** 大概30min。
第三是点胶。把凝好的胶取出来放在有与制胶同浓度TBE缓冲液的电泳槽中，取每1微升Loading Dye（一种沉淀剂，使点胶后样品沉到胶孔底部不浮上来）混匀5微升的核酸样品。
四是电泳啦！电压电流和事件看你的样品而定吧，一般这种小胶我们是用110V、400mA跑25min就可以了。
最后当然就是在紫外凝胶成像 *** 看结果啦！
五、什么是紫色琼脂糖凝胶电泳
1、凝胶加载染料，紫色（6X）是NEB的主要凝胶加载染料，适用于尖锐，紧密的条带。无紫外线阴影。包含 Ficoll，用于更明亮、更紧密的表带®。含有EDTA以阻止酶促反应。与琼脂糖和非变 *** 聚丙烯酰胺凝胶相容。我们的紫色凝胶加载染料可锐化条带，并消除其他染料所见的紫外线阴影。
2、琼脂糖凝胶电泳是实验室常用的技术之一，广泛运用于DNA与RNA的鉴定和分离。实验 *** 作较为简单，主要步骤包括:
3、(1)样品准备：在核酸样品（RNA或者DNA）中加入电泳上样缓冲液，常用的如Gel Loading Dye, P *** ple(6x)，即5份样品中加入1份缓冲液；
4、（2）制胶：称取1g琼脂糖，加入100ml的TAE(1x)或者TBE（1x），配制成1%的琼脂糖，使用微波炉加热数分钟使琼脂糖完全融化，加入10μl CelRed,混匀后倒入制胶模具， *** 上适宜孔径的梳子，待胶凝固后，拔出梳子，放入含TAE(1x)或者TBE（1x）Buffer的电泳槽；注意：TAE使用范围较TBE更为广泛，要进行胶回收通常使用TAE，但TAE缓冲能力低，不宜进行长时间电泳。相比之下，TBE中离子强度高，缓冲能力好，可维持长时间电泳，若DNA大小在1000bp以内，且不进行胶回收，则选用TBE缓冲液更佳。
5、（3）电泳：(2)中的Buffer应完全浸没琼脂糖凝胶，在上样孔中加入Marker和样品，120V电泳（通常电泳时间在半小时以内）。注意，上样孔应在负极同侧。
6、（4）显像：将电泳后的凝胶进行紫外成像，拍照记录。
六、dna的琼脂糖凝胶电泳为什么用0.8%
DNA分子带负电，从琼脂糖凝胶的负极向正极泳动，速度依赖于其分子质量。小的紧密的DNA分子的较大伸展片断容易穿过琼脂糖介质。依据所要分离的DNA分子的大小来选择琼脂糖的浓度，例如质量浓度3mg/ml的琼脂糖用来做DNA *** 段电泳（>20 000碱基）而0.8%只能电泳小的片断。
七、琼脂糖凝胶电泳的原理及影响因素
1、琼脂糖凝胶电泳是常用的生物化学实验 *** ，用于分离和分析DNA、RNA或蛋白质等生物大分子。
2、琼脂糖凝胶电泳的原理是利用凝胶孔径大小的差异来实现生物大分子的分离。琼脂糖是一种多糖类物质，可以在水中形成凝胶状的 *** 结构，其中孔径的大小与琼脂糖的浓度成反比。当电场施加在凝胶上时，带电的分子会向电场方向迁移，但由于凝胶孔径的 *** ，分子的迁移速率会与其分子大小成反比，从而实现分离。
3、琼脂糖凝胶电泳的影响因素包括以下几个方面：
4、凝胶浓度：凝胶浓度决定了凝胶孔径的大小，一般使用不同浓度的琼脂糖来适应不同大小的目标分子。较低浓度的琼脂糖凝胶适合分离较大的分子，而较高浓度的琼脂糖凝胶适合分离较小的分子。
5、电场强度：电场强度决定了分子的迁移速率，一般较高的电场强度可以加快迁移速度，但也会增加热量和凝胶溶解的风险。正确选择适当的电场强度可以实现良好的分离效果。
6、缓冲液pH值：缓冲液的pH值对凝胶电泳的分离效果有影响。一般使用含有缓冲剂的缓冲液来保持适当的pH值，以确保目标分子保持带电状态并稳定分离。
7、运行时间：运行时间决定了分子在凝胶中迁移的距离，通常根据目标分子的大小和凝胶孔径来确定适当的运行时间。
8、样品处理：样品的预处理也会影响琼脂糖凝胶电泳的结果。例如，在DNA电泳中，需要进行DNA片段的 *** *** 内切酶切割和核酸染色等处理。
9、这些因素的合理选择和 *** 作能够使琼脂糖凝胶电泳达到良好的分离效果，并成功分析目标生物大分子。
关于琼脂糖凝胶电泳的内容到此结束，希望对大家有所帮助。
